核酸提取（核酸提取液是什么成分）

核酸几种方法？

核酸检测有四种方式：

1、口咽拭子检测：通过口腔进入的方法采集口咽部标本，用灭菌棉拭子擦拭咽侧壁及咽后壁数次。做咽拭子之前，不要使用抗菌药物，采样前30分钟内请勿吸烟，喝酒，不吃口香糖等刺激性食物。

2、鼻咽拭子检测：通过鼻孔进入的方式采集鼻咽部标本，将拭子以垂直标方向插入鼻孔，拭子顶端到达鼻咽腔后壁时停留约15秒，轻旋3次。取样者可在侧方采样，暴露的风险较低。

3、深咳痰液检测：患者深咳后，将咳出的痰液收集在标本容器内。目前深咳痰液的检出率高于口咽拭子和鼻咽拭子。

4、肛拭子检测：用拭子插入肛门里面2-3cm，然后旋转四到五圈之后，拔出即可。整个过程大概10秒钟左右，不会有太大的不适感。反而相较于鼻咽拭子舒适度更高。

核酸检测的方法，有定磷法、定糖法、紫外线吸收法和荧光检测法。具体如下：

一、定磷法简单快捷，且灵敏度高，缺点是易受蛋白质和核苷酸影响；

二、定糖法灵敏度也高，但特异性差，且戊糖容易与其他物质产生反应，干扰结果；

三、紫外线吸收法适用于浓度大的核酸溶液，通常人体感染新型冠状病毒后，咽部所含的病毒量极少，所以一般不用此种方法检测；

四、荧光法是目前广泛被使用的检测法，对标本逆转录扩增，使病毒片段达到一定检测数量后进行检测，缺点是由于受采样标本、运输等多种因素影响，可能出现假阴性

层析技术是否可以用于核酸的提取?

层析技术可以用于核酸的提取。离子交换层析技术主要用于分离氨基酸，多肽及蛋白质，也可用于分离核酸，核苷酸及其它带电荷的生物分子。简化核酸纯化流程，降低对操作人员的技术要求，预期核酸回收率可达到95%以上，提取产物具有较高纯净度，无核酸酶、有机盐离子和杂质蛋白的影响。

微生物核酸提取需要多久？

产品特点

◎操作简便快速，20分钟左右即可完成样本中微生物 核酸 的提取；

◎提取核酸纯度高，无抑制剂，1.75A260/A280≤2.0；

◎独特的裂解液配方，适合于血液、唾液、拭子、水样和粪便中微生物核酸的提取，特别适合于家畜微生物感染的分子检测。

产品介绍

BIOG 微生物核酸提取试剂盒是我公司研发团队在综合比较了国外同类优质产品的基础上反复研制优化而成，专门用于样本中微生物核酸的快速提取纯化，特别适合于猪、牛、羊等家畜微生物感染的分子检测。本试剂盒采用独特的裂解液配方，可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血、拭子、唾液、水样、粪便、土壤等样本中提取高质量的微生物核酸，操作简便快速，20分钟左右即可完成微生物核酸的提取。核酸提取得率较高，可在200μL全血中提取2-4μg左右核酸。BIOG 微生物核酸提取试剂盒采用了最新的优质离子膜，裂解液和洗脱液经过多次优化，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，特别适用于样本中微生物包括细菌、病毒等感染的分子检测。

操作步骤   （ 请自行准备无水乙醇、异丙醇和灭菌1.5mL离心管 ） ：

1. 取出洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液B：18mL加入42mL无水乙醇；36mL加入84mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

2. 取1.5mL离心管，加入200μL血液或其它样本，再加入200μL 裂解液及40μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴10 分钟。

3. 加入150μL异丙醇（总体积的25%），混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液；

5. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，静置1分钟，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

8. 按每份样本30μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取300μL 洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入30 μL 预热洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集核酸溶液，提取的核酸即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。裂解液如拆封后未使用完毕，应及时旋紧管

盖，密闭保存。

2. 单次血液标本用量一般为200μL，如血液量较多，请使用BIOG中量全血核酸提取试剂盒。

3. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水。

4. 提取的DNA如暂不使用，应-20℃保存，RNA应-70℃保存，可适当加入RNA保护因子（货号：51090，一般50μLRNA溶液加入2μL）。

从核酸采样到出结果，中间需要经历哪些过程？

01、采样

首先我们得到指定的地点去进行核酸的采样，在做核酸采样时需要注意排队的间距，一般间距都要达到一米以上。现在正常情况下都是采集咽拭子，但情况特殊的时候也会直接捅鼻子。

02、标本的转运

标本采集好了之后需要进行转运，因为采样点和检测的地点是不在同一个地方的。在检测的时候是需要用到比较精密的仪器，所以核酸检测的实验也是有着比较特殊的环境要求，样本采好了之后，需要统一把这些样本送到各地的实验室去进行检测。

03、录入标本的信息

这些标本的包装会比较的严密，而且会被安全送到实验室，这个时候需要先进行信息系统的录入。这个步骤是比较繁杂的，因为需要把每一个样本的包装拆开，在拆开的时候需要喷洒酒精做好安全防护。另外就是这些标本都是要手工录入的，一定要保证零失误，所以花费的时间会多一些。

04、提取核酸

基本的信息录入结束之后就要对标本进行处理了，需要把核酸给提取出来，然后才能进行扩增。在操作的时候后需要把每一个标本的盖子打开，然后用加样枪来吸取里面的标本，最后再去进行核酸的提取。

05、配制试剂

这个步骤的操作是比较严格的，在操作的时候不可以以污染标本，而且需要全手工分装。

06、上机检测

检测的时间大概是在一个小时到两个小时之间，仪器启动扩增程序之后，不可以中途停下来添加新的样本。所以一般都是要等到同一批的结果扩增结束之后，才可以进行下一批的扩增。当扩增结束之后，检测结果自然也就出来了，这个时候我们就可以取到自己的核酸检测报告。

磁珠法提取核酸的原理

磁珠法提取核酸的原理是依据与硅胶膜离心柱相同的原理，运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。

磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。

利用二氧化硅包被的纳米磁性微球的超顺磁性，在Chaotropic盐（盐酸胍、异硫氰酸胍等）和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。

磁珠法核酸提取，具有传统DNA提取方法无法比拟的优势，主要体现在：

①能够实现自动化、大批量操作，目前已有96孔的核酸自动提取仪，用一个样品的提取时间即可实现对96个样品的处理，符合生物学高通量的操作要求，使得传染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对，这一特点使得传统方法望尘莫及；

②操作简单、用时短，整个提取流程只有四步，大多可以在36-40分钟内完成；

③安全无毒，不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害减少到最少，完全符合现代环保理念；

④磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。

核酸的提取方法有几种

DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。核酸是一类生物聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质。核酸是脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称。

脱氧核糖核酸（英文DeoxyriboNucleicAcid，缩写为DNA）是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种。DNA携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息，是生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。DNA由脱氧核苷酸组成的大分子聚合物。脱氧核苷酸由碱基、脱氧核糖和磷酸构成。其中碱基有4种：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。