植物总dna提取知识（植物总dna提取中各试剂的作用）

阿立指南实时热点 2023-05-29 09:05:08 115

植物叶绿体DNA的提取步骤?注明药品用量和浓度哦~

沉淀加70%ALC洗涤离心去ALC，室温挥发ALC5-10min，加TE 500ul，加10ul RNAase (终浓度4mg/ul)，即5ul。37℃ 30min 或65℃ 15min。

取少量白菜叶片，切成小块，一定要小！！装入注射器中，压紧，堵住针管的头，用力抽，再将叶片放入显微镜中观察即可。

先以5000g离心15分钟后，获取上清液。接着将上清置于氯化铯梯度离心管中，10万g超速离心0.5h。用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。

第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。

于无需昂贵仪器和药品，提取的DNA 纯度能够满足一般分子生物学的需要，一直作为DNA 提取的常规方法。但这种方法操作步骤复杂，耗时长，易交叉污染，残留在DNA 溶液中有机物质对DNA 聚合酶有抑制作用。

根据其序列对比可以构建一定的进化树之类的。方法不太清楚，大致是把植物细胞的叶肉细胞研碎，再离心分层，不同的细胞器会被分离至不同层。然后粗提出叶绿体最后用试剂盒分离提纯提出里面的DNA。

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。

主要提一下CTAB法提取植物基因组DNA原理。

碱煮法提取植物DNA的原理是：高PH的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。

原理：析出溶解在NaC1溶液中的DNA。用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤：提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。

原理就是去掉植物细胞壁细胞膜质体线粒体叶绿体剩下细胞核了。就是DNA了。

植物组织提取基因组DNA 材料幼嫩叶子。设备移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。

第二种方法是凝胶电泳分析，看有无断裂降解。影响DNA提取质量的因素：如果实验开始植物样品不经液氮处理，则提取液中的CTAB浓度需要提高到4%。在大多数情况下，使用0.1%巯基乙醇，并不能完全抑制叶片中的氧化作用。

DNA提取浓度低可能有以下原因 1)实验材料量太少，建议适当增加增加样本量；2)样品裂解不充分。保持样本量不变的情况适当增加裂解液。